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微量分光光度的原理是什么?有哪些常见用途?

分光光度计是利用分光光度法对物?#24335;?#34892;定量定性分析的仪器。分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或?#27426;?#27874;长范围内光的吸收度,对该物?#24335;?#34892;定性和定量分析。

单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式:

A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc

式中:A为吸光度;

I.为入射的单色光强度;

I 为?#24178;?#30340;单色光强度;

T 为物质的?#24178;?#29575;;

k 为摩尔吸收系数;

L 为被分析物质的光程,?#24162;?#33394;皿的边长

c 为物质的浓度

物质对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在?#27426;?#26465;件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可由上式计算出供?#20113;分?#35813;物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收但可在?#27426;?#26465;件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,?#20160;?#23450;时应用标?#35745;?#25110;对照品同时操作。

应用领域:

超微量分光光度计已成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量及细菌生长浓度的定量。


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